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组培知识

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花叶络石组培快繁技术(三)

4.2芽的诱导
将接种后20d的无菌苗转移至培养基(1)MS+NAA0.05mg/L+6BA2.0mg/L上,5-7d茎尖开始萌动,10d腋芽萌动,芽逐渐长大,继续培养20d,茎段上所有腋芽均萌发成侧枝。侧枝生长正常,叶片深绿色,茎基部愈伤组织较少,黄绿色。
4.3试管苗的增殖
将试管苗侧枝分割成2-3芽为一段,接种于培养基(2)MS+IAA0.2mg/L+6BA1.5 mg/L上。10d后茎段叶芽萌动,30d长成大量侧枝,并有大量双生枝和三生枝产生。接种茎段形成具有5-8侧枝的丛生苗,平均增殖5.8倍。试管苗节间明显伸长,幼嫩叶片茎杆均呈淡红色,叶片大,茎杆较粗,组织不充实,茎基部愈伤组织大。以后每30d继代1次,经3-4次继代试管苗出现玻璃化现象。
4.4壮苗培养
将经增殖培养的试管苗每继代3-4次后转移至培养基(3)MS+NAA0.5mg/L+6BA0.5mg/L上。40d后形成大量侧枝,平均每茎段4-6侧枝,侧枝平均长1.8cm,平均增殖3.1倍。基本无双生枝或三生枝。侧枝生长健;组织充实,叶色深绿,基部愈伤组织小,黄绿色,无玻璃化现象。
4.5根的诱导
将生长健壮、长度大于1.2cm的侧枝分割,转移至培养基(4)l/2MS+NAA0.5 mg/L+IBA0.2 mg/L上。提高光照度至2500-3000lx,延长光照时间至每天16h。培养15d后开始有根原基形成,根原基形成后即可炼苗。20-25d调查生根情况,生根率73%,每棵苗平均生根l-2条。
4.6炼苗移栽
将生根的试管苗带瓶移入栽培温室,培养1周。当根长0.5-1cm时,打开瓶盖炼苗3-5d,将生根苗取出,洗净根部培养基,栽植于育苗穴盘中。以黑泥碳为基质,温度控制在20-25℃之间,湿度为85%-95%左右,20d即可成活,成活率达73%以上。