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植物组织培养的设备与使用方法(一)
植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。要达到无菌操作和无菌培养,就需要人为创造无菌的环境,使用无菌的器具,同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备,实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
1. 实验室基本组成
(a)无菌操作室
在植物组织培养中,无菌操作室(clean chamber)是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。由于植物组织培养需长时间的无菌操作,所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。微生物的培养生长时间短,而植物组织培养短的一个月,长的达几年。所以,防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是:干净无菌、密闭、光线好。一般安装滑动门,使空气不致流动,以防外界菌及尘埃的侵入;墙壁光滑平整,地面平坦无逢,便于清洁工作;室内安装紫外灯,以便灭菌,还要有照明装置及灯座,以备临时增加设备之用;室内有超净工作台、移动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。面积根据工作性质可大可小,小的无菌操作室一般一间 5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台,分单人使用和双人同时连续作业使用两种。超净台中准备接种用的器具,如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等,以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种,还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜,以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等,也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间,以防工作人员进出时带进杂菌。控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔,便于观察和参观。在预备室可放置工作服、鞋、帽等,也需要装自来水和紫外灯。
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