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‘白仙女’的组织培养与快速繁殖

一、植物简介
‘白仙女’是兰科德加莫兰属多年生常绿草本植物。德加莫兰属是由长萼兰属、堇花兰属、齿舌兰属三属间杂交而成。整花外形犹如身穿白色婚纱的少女在翩翩起舞,极具动感和美态,因此美其名曰‘白仙女’。
二、培养条件
腋芽启动培养基:①MS+6BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L+抗坏血酸25+柠檬酸25,
原球茎诱导培养基:②MS+6BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,
原球茎增殖及丛生芽诱导培养基:③花宝1号2.0g/L十MS(除大量元素外其余全量)+5%香蕉,
壮苗及生根培养基:④花宝1号2.0g/L+MS(除大量元素外其余全量)+5%香蕉+0.2%蛋白胨+NAA0.2mg/L。
上述培养基均加入0.52%琼脂粉,3%白糖,pH值5.5。培养温度为25℃,光照时间10h/d,原球茎增殖阶段光强度为18μmol/(m²·s),壮苗生根阶段光照强度为36μmol/(m²·s)~45μmol/(m²·s)。
三、材料与方法
在无病虫害的母株上用消过毒的刀片切取3cm~5cm的幼芽,最好选择健壮、叶片未展开的芽体,用洗衣粉轻轻刷洗表面,再用清水洗净。将外围叶片层层剥离,剩下0.5cm长的嫩叶不剥离。芽体直径约1.0cm,高1.0cm,呈圆锥状,每层均有一个腋芽。用10%的次氯酸钠溶液浸泡10min,无菌水冲洗3次~5次。切去末端接触消毒液的部分,但不能切得太深,否则外植体材料容易坏死。接于①号培养基上,黑暗培养5天。由于芽体会分泌出黄色汁液,使基质严重褐化,在培养基中添加抗氧化剂有利于新芽的长出。
四、生长与分化
1、顶芽及腋芽的启动:等芽体长成1.0cm高、0.5cm粗时,把顶芽及腋芽从母体上单独切下,并将芽体上半部切去,保留生长点,将此材料接于②号培养基上。
2、原球茎的诱导与增殖:顶芽及腋芽在②号培养基中,接触培养基的组织逐渐开始膨大,颜色从绿色变成黄白色,此阶段为愈伤组织的形成阶段,体积增大为原来的10倍,时间较长,约需要30天。此后,进入原球茎形成阶段,从黄白色的愈伤组织表面,有绿色小点散布,并逐渐长大成黄绿色的原球茎。将原球茎以“十”字方式纵切成0.5cmx0.5cm的小块,接种于③号培养基中,增殖周期为20天,增殖系数为8~10。对原球茎的转接必须及时,若长时间不转接,原球茎分化成丛生芽,可以把上部叶片横切去留下基部,同样接于③号培养基中,但原球茎增殖率会大大降低。
3、丛生芽的诱导取已增殖的原球茎,不必切割,直接接种于③号培养基中,各材料之间预留足够的位置。经一个月的培养,原球茎分化成从生芽,长势旺盛,1cm²的材料约长出15株苗,高约2cm,3片~4片叶子,个别已有1条~2条0.5cm~1cm长的根,各植株之间以类似下胚轴的部分相连,极易进行分株处理。
4、壮苗生根培养:将从生芽单独分离开,接种于④号培养基中,500mL兰花瓶中可接20株。
五、移栽
移栽时,将小苗取出,清理根上的基质,用已消毒的水苔包裹根部栽于1.5寸(约3.8 cm)胶杯中即可。移栽初期在阴凉通风处培养,温度保持20℃~25℃,50%的自然光处理,每天喷雾。
 
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